RNA組分分析作為許多不同工作流程的重要環節，包括但不限于?品檢測和代謝組學研究。
這類分析的挑戰之?是它們的極性較強，而且結構相似。
可以使用反相LC，但通常需要離?對試劑增加保留，而使用離子對試劑時需要很長時間才能在系統中達到平衡，使分析工作更加復雜。
今天小編就給大家介紹一個分離核酸堿基、核苷、核苷酸及磷酸核糖等13種RNA組分的HILIC方法。
圖1. 核酸堿基、核苷和核苷酸的分析物結構。
LC系統：配備四元溶劑管理器的ACQUITY Premier系統
MS系統：Xevo TQD
色譜柱：規格均為2.1x50 mm
ACQUITY UPLC BEH Amide（貨號：186004800）
Atlantis Premier BEH Z-HILIC（貨號：186009978）
其它品牌A：HILIC-Z
其它品牌B：Polar X
樣品瓶 ：LCMS TruView zui大回收樣品瓶（貨號：186005668CV）
流動相A：水
流動相B：乙腈
流動相C：200 mM甲酸銨(pH 3.0)
梯度表：
柱溫：50 °C
圖2. 13種RNA組分在四種不同的HILIC固定相上的分離結果（1.尿嘧啶；2.腺嘌呤；3.腺苷；4.尿苷；5.胞嘧啶；6.?嘌呤；7.胞苷；8.?苷；9.單磷酸腺苷；10.單磷酸尿苷；11.磷酸核糖；12.單磷酸胞苷；13.單磷酸?苷）。
本次實驗中使用的四支色譜柱，除BEH Amide外，其余均為兩性離子或混合模式的色譜柱，由上圖可見，它們在RNA分析物保留和選擇性方面存在差異。
只有Atlantis Premier BEH Z-HILIC色譜柱能使所有化合物實現分離，而在其他色譜柱上至少均出現?組共洗脫化合物。
雖然Xevo TQD也可以檢出這些化合物的峰，但更好的分離度便于對這些物質進行更好地積分和表征。
Atlantis Premier BEH Z-HILIC色譜柱采用的MaxPeak高性能表面(HPS)硬件可減輕磷酸化合物與色譜柱金屬表面間的次級相互作用。
在某些條件下，這些金屬和分析物的相互作用會導致峰形差異，甚?可能導致樣品損失。
注：本文分享自【沃特世技術服務】公眾號。
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