高效液相色譜柱特點介紹

液相色譜柱是按照嚴格的標準生產和測試的。如果能按照以下信息使用和維護色譜柱，不僅可以獲得更好的測試結果，而且可以延長色譜柱的使用壽命。

有必要了解更多關于所用樣品的信息，例如結構、分子量、酸堿度、極性等。當您要選擇色譜柱時。

1、如果樣品是極性弱酸性的，我們可以選擇C18 HPLC色譜柱在100%酸性水溶液條件下檢測，即選擇保留好的極性化合物并能承受100%純水的色譜柱。

2、可選擇CN、NH2或硅膠柱、HILIC（親水色譜），如果樣品極性過強或酸性過強，也可以使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換柱。（問題是離子對試劑平衡需要很長時間，需要更精 確的流動相pH值。否則重復實驗會很困難。更糟糕的是，很難洗掉離子對試劑。一般情況下，對于使用離子對的色譜柱，不適合用于其他實驗）。

3、如果堿性化合物極性太強，或者堿性太強，可以選擇寬pH C18柱在高pH值下檢測（優(yōu)點是方法開發(fā)簡單，缺點是目前實施該技術的色譜柱品牌較少，價格較高）或使用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，也是一種非常經典的檢測堿性樣品的方法）。選擇強離子交換柱，不適合分析其他樣品。相對pH要求更精 確，否則難以重復實驗。也可使用 C18+ 強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

4、如果樣品呈堿性，選擇高純硅膠柱（高純硅膠不含金屬雜質，硅膠端基被封閉）或一些改良的C18柱。它們會減少堿性化合物的拖尾，一般選擇在中性或偏堿性條件下進行，因為這樣可以增加堿性樣品的保留。

反相高效液相色譜柱的主要功能和物理性質

反相高效液相色譜柱以其分離效率高、選擇性好、檢測靈敏度高、操作自動化、應用范圍廣等優(yōu)點成為廣大分析人員的首 選分析方法。流動相在液相分離中起著重要作用，是液相色譜柱系統(tǒng)的大腦。能否選擇合適的流動相會影響整個分析的質量。掌握流動相選擇的理論知識對于分析人員，尤其是藥 物分析人員來說是非常有必要的。

選擇合適的流動相進行分析是一項艱巨且非常艱巨的任務。盡管沒有關于流動相選擇的簡單技巧、捷徑或秘密，但有一些理論可以簡化這個過程。反相HPLC的流動相一般由水相和有機相組成。

反相 HPLC 色譜柱的物理特性

硅膠純度：硅膠純度對于強極性化合物的分離更為重要。殘留的金屬離子濃度和二氧化硅雜質會影響化合物的峰形。硅膠表面金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，容易出現拖尾現象。

A型硅膠由金屬硅酸鹽制成，硅膠金屬含量高，純度低，可用于中性化合物和非離子化合物的分離。

B型硅膠采用無金屬工藝制備，純度高，酸性弱，僅含少量金屬。可用于分離離子化合物、可電離化合物，尤其是堿性化合物。

目前的色譜柱填料主要是B型硅膠，但不同品牌、型號的色譜柱硅膠表面金屬含量仍略有差異。如果色譜峰形較差，則需要注意不同品牌色譜柱的硅膠純度。

色譜柱尺寸：增加色譜柱的長度可以在一定程度上提高柱效，但也會增加壓力，導致峰展寬；較寬的柱徑會增加上樣量，但也會增加橫向擴散，這也會導致峰展寬。窄柱徑可節(jié)省溶劑，減少橫向擴散，但壓力較高，系統(tǒng)要求較高。